Cromatografía en capa delgada

Métodos de análisis de droga. Cromatografía en capa fina o delgada. ¿Qué es la cromatografía en capa delgada? Procedimientos de cromatografía. Instrumentos de laboratorio.

La cromatografía en capa delgada es un método simple y eficiente que sirve para identificar y cuantificar metabolitos secundarios en las drogas vegetales, sus extractos y tinturas e igualmente para que en una formulación farmacéutica sea posible identificar la presencia de un metabolito secundario de interés farmacológico. 

Existen dos procedimientos, uno sobre papel y otro sobre placa de silicagel. 

Tanto al papel como a la placa de silica gel se les denomina fase estacionaria.

En ambos se deposita el material a ensayar con una micropipeta de laboratorio o instrumental semejante (una jeringuilla de muestreo), sobre una línea de referencia o de partida. La placa de silica gel con la muestra depositada se coloca dentro de una cámara con una mezcla de solventes orgánicos que son específicos para cada ensayo a la cual se le denomina fase móvil.

Al cabo de cierto tiempo especificado se determina el corrimiento que ha tenido la mezcla de solventes los cuales se desplazaron sobre la fase fija en el papel o placa de silica gel y se determina la distancia desde el punto en donde se colocó la muestra hasta el borde extremo del corrimiento de la fase móvil.

En la medida que la muestra se desplaza sobre la fase fija va dejando un rastro de sustancias orgánicas que deben ser reveladas por medio de un reactivo químico o exponiendo la fase móvil bajo los rayos de la luz ultravioleta.

Se determina la distancia que se encuentra la mancha o manchas detectadas desde su posición al punto de partida de la muestra. La razón entre la distancia a que se encuentra la mancha analizada y el total del corrimiento de la fase móvil se le llama razón de fraccionamiento Rf.

Cuando los principios activos de una droga no son conocidos, la identificación de la droga puede ser realizada a través de la determinación de sustancias características de la planta en cuestión, aunque no tengan actividad farmacológica (perfil cromatográfico) contra un extracto preparado bajo las mismas condiciones de la muestra, pero con un material vegetal de referencia.

Estas sustancias denominadas marcadores (o marcadores positivos), son seleccionadas entre los diferentes compuestos característicos de la planta medicinal. El uso de ellas debe limitarse solamente a la identificación del material vegetal, de los extractos y de las tinturas. Los marcadores pueden servir, igualmente, para identificar la presencia de la droga en un fitofármaco.

Cuando los marcadores no son las sustancias responsables de la acción farmacológica de la droga, no deben ser utilizados para las determinaciones cuantitativas.

La presencia de manchas o bandas coloreadas con el mismo valor de razón de fraccionamiento (Rf) de las sustancias de referencia en el cromatograma de la muestra, no es suficiente para identificar el material vegetal.

La existencia de otras manchas o bandas coloreadas debe ser anotada, así como su posición en relación a la posición de las sustancias de referencia utilizada. El uso de sustancias de referencia que no son constituyentes de la planta es de utilidad para determinar la ocurrencia de falsificaciones, estas sustancias reciben la denominación de marcadores negativos.

Debe especificarse las condiciones cromatográficas de la fase estacionaria, la fase móvil y el revelado.

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